12 May Efecto bacteriostático y bactericida «in vitro» de DigestoCid© y dos productos de la competencia
Fundamentos del diseño experimental
Este experimento utiliza un método de dilución y neutralización que se basa en el método europeo oficial EN 1040: 2005, «Desinfectantes químicos y antisépticos: prueba de suspensión cuantitativa para la evaluación de la actividad bactericida básica de los desinfectantes y antisépticos químicos».
Los fundamentos del método son los siguientes:
Para estimar la actividad antimicrobiana de un desinfectante o antiséptico, se mezcla una dilución del compuesto a testar con una suspensión de células bacterianas y, después de un período de incubación, se determina la capacidad de crecimiento de las bacterias supervivientes.
En el caso de los ácidos débiles, se ha establecido que su actividad antimicrobiana in vitro puede ser sobrestimada si no se aplica un agente neutralizante. La razón es que los ácidos débiles actúan sobre las bacterias a través de dos mecanismos de acción:
- Estrés ácido, a través de la disminución del pH
- La difusión del ácido débil en forma no disociada a través de la membrana celular bacteriana, seguida de su disociación intracelular, acidificando el ambiente celular y alterando el metabolismo bacteriano.
Siempre que se utiliza un ácido débil como antiséptico o desinfectante, la acción antimicrobiana mediante la reducción del pH ambiental (Mecanismo de acción nº1) variará según las condiciones de aplicación de dicho ácido. Por ejemplo, cuando se dosifica una cantidad de ácidos débiles en el agua de bebida, el pH final del agua dependerá del pH inicial y de la dureza del agua. Lo mismo sucede cuando el ácido débil viaja a través del sistema digestivo del animal, porque cada órgano digestivo tiene un pH diferente.
Por esta razón, las pruebas in vitro para la valoración de los ácidos débiles como antimicrobianos se centran en la evaluación de su capacidad de acción a través del mecanismo nº2, es decir, de la capacidad del ácido débil de penetrar en la pared celular bacteriana y desorganizar el metabolismo celular.
Al agregar un neutralizador, en el caso de este experimento el tampón del el agua de peptona tamponada y el hidrógeno fosfato disódico, la actividad antimicrobiana a través del mecanismo de acción nº1 se detiene o se atenúa en gran medida, y el test in vitro mide principalmente la actividad antibacteriana a través del mecanismo de acción nº2 .
Materiales
- Agua de peptona tamponada (BPW)
- Agar Muller Hinton (MH)
- Cepa de Salmonella, ATCC 14028
- Cepa de E.coli, ATCC 25923
- Hidrogenofosfato disódico
- Productos a ensayar: DigestoCid©, Producto de la competencia A, Producto de la competencia B
- Tubos de incubación y placas de Petri
Procedimiento
- Diluir DigestoCid©, Producto A y Producto B al 5%.
- Preparar BPW. Dispensar en 3 * 8 * 2 tubos, 8 ml / tubo.
- Agregar 8 ml de cada producto diluido al primer tubo de ensayo y efectuar una dilución de gradiente. La concentración final de cada producto es la siguiente:
- Agregar 1 ml de 0.015 mol / L de hidrógeno fosfato disódico a cada tubo de ensayo, mezclar bien y dejar reposar durante 5 minutos.
- Agregar 1 ml de 10E3 UFC / ml de suspensión de Salmonella o 1 ml de 10E3 UFC / ml de suspensión de E. coli a cada tubo de ensayo.
- Incubar a 37ª C durante 24 horas.
- Concentración mínima inhibitoria: después de la incubación, observar la presencia de turbidez. La concentración más baja que no presenta turbidez se considera la concentración mínima inhibitoria. La concentración inhibitoria mínima (CMI) se define como la concentración más baja de un agente antimicrobiano que tiene efecto bacteriostático (evita el crecimiento de las bacterias).
- Concentración mínima bactericida: tomar 1 ml de cada tubo de cultivo del apartado anterior, sembrar en una placa de Petri y vertir 15 ml de agar MH. Incubar a 37° C durante 48 horas. Observar el crecimiento de colonias. La concentración más baja a la que no se observan colonias es la concentración mínima bactericida (CMB), que se define como la concentración menor de un agente antibacteriano requerida para destruir el 99.9% de una determinada bacteria después de un tiempo de incubación determinado.
- La CMB es complementaria al CMI; Mientras que la CMI determina la cantidad mínima para inhibir el crecimiento, la CMB determina la cantidad mínima necesaria para destruir un microorganismo.
Resultados
Dosis recomendadas de los productos a nivel comercial
- DigestoCid©: 0.5-1 ml / L de agua de bebida
- Producto A: 1.5-2 ml / L de agua de bebida
- Producto B: 1-2 ml / L de agua de bebida
Conclusiones
Al determinar el efecto bacteriostático de los tres productos (Concentración mínima inhibitoria, CMI), todos los productos presentaron la misma CMI contra Salmonella, mientras que DigestoCid© presentó la CMI más baja contra E. coli, seguido por el producto A y el producto B.
Al determinar el efecto bactericida de los tres productos (concentración mínima mínima, CMB), todos los productos presentaron la misma CMB contra Salmonella, mientras que DigestoCid© y el producto A fueron más eficaces que el producto B contra E. coli.
Se puede concluir que DigestoCid© fue el producto el más efectivo contra Salmonella y E. coli «in vitro».
Este ensayo demuestra que DigestoCid © es efectivo como desinfectante del agua de bebida a las dosis comerciales recomendadas (0.5-1 ml / L de agua potable) porque su CMI y CMB para Salmonella y E. coli oscilan entre 0.39 ml / L y 0.78 ml / L .
Su dosis recomendada menor en comparación con los productos competidores A y B es otra ventaja competitiva que presenta DigestoCid©.
Productos de elección
DigestoCid© está indicado como acidificante, higienizante del agua de bebida y para mejorar la salud intestinal en aves y cerdos de todas las edades. Contiene:
- Ácidos orgánicos tamponados, que reducen el pH del agua e inhiben el crecimiento de bacterias Gram negativas.
- Ácidos grasos monoéster, también llamados ácidos grasos de cadena media, que inhiben el crecimiento de bacterias Gram negativas y Gram positivas. Además, tienen efectos antivirales.
- Aceites esenciales y fitoquímicos con propiedades antibacterianas, antifúngicas, antivirales y antioxidantes.
DigestoCid© tiene un espectro de acción más amplio que los productos basados únicamente en ácidos orgánicos y permite una eficacia antibacteriana y antifúngica superior a un pH menos ácido (5,5-6,5) que la competencia.
Ciertas declaraciones sobre las propiedades saludables de nuestros productos pueden no ser aplicables en su país.