Extracción de la muestra: el producto competidor se extrajo mediante extracción ultrasónica con etanol al 50% durante 30 minutos, y la concentración final del extracto fue de 100 g/L. PhytoAqua se diluyó a 100 g/l con agua pura.

Preparación de la suspensión bacteriana: tomar Escherichia coli, agregar 100 ml de caldo de lixiviado de cerebro-corazón esterilizado, activar la incubadora a temperatura constante de 37°C durante 24 horas, aspirar 1 ml de suspensión bacteriana activada en 100 ml de caldo de lixiviado de cerebro-corazón y multiplicar el cultivo. En una incubadora a temperatura constante de 37°C durante 24 horas, determinar la concentración de la suspensión bacteriana final mediante el método de recuento en placa y diluirla a 1*10 ⁵ ufc/ml en agua estéril como reserva; tomar Vibrio parahaemolyticus, agregar 100 ml de caldo de lixiviado de cerebro-corazón de NaCl al 3%, activar y multiplicar el cultivo en una incubadora de temperatura constante de 37 ° C durante 24 horas. 

Método de extensión en placa para medir el efecto inhibidor sobre E. coli: el medio MH se esterilizó en autoclave, se enfrió a aproximadamente 80 °C y se añadió el producto según una proporción determinada. El producto y el medio se mezclaron bien para que la concentración final del producto fuera 0.1 g/l, 0.2 g/l, 0.5 g/l, 1 g/l, 2 g/l. Se utilizó medio sin producto como grupo control. Se añadió 1 ml de solución bacteriana de E. coli a una concentración de 10 ⁵ ufc/ml a cada placa de Petri, se vertieron unos 20 ml de medio (aproximadamente 45°C) y se mezcló bien. Se enfriaron y solidificaron las placas invertidas en una incubadora a 37°C durante 24 horas.

Efecto inhibidor sobre Vibrio parahaemolyticus mediante el método de extensión en placa: el medio de Vibrio parahaemolyticus se hirvió y se esterilizó, se enfrió hasta aproximadamente 80 °C y el producto se añadió según una determinada proporción, y el producto y el medio se mezclaron bien para obtener la concentración final de los productos de 0.05 g/l, 0.1 g/l, 0.2 g/l, 0.3 g/l, 0.5 g/l. Se utilizó medio sin producto como grupo control. Se añadió 1 ml de fluido bacteriano de Vibrio parahaemolyticus a cada placa y se vertieron y mezclaron bien aproximadamente 20 ml de medio (a aproximadamente 45°C). La concentración de Vibrio parahaemolyticus también se determinó mediante recuento en placa. Después de enfriar y solidificar, se incubaron en posición vertical en una incubadora a temperatura constante de 37 °C durante 24 horas.

Efecto inhibidor sobre Vibrio parahaemolyticus mediante el método de tubo de ensayo y siembra por estría: la concentración inhibidora mínima de PhytoAqua y el producto competidor se determinó mediante el método de doble dilución, y luego la concentración bactericida mínima de la concentración correspondiente se determinó mediante el método de siembra por estría. Se preparó y esterilizó caldo lixiviado cerebro-corazón de NaCl al 3% y se dispensó 5 ml en cada tubo de ensayo. El extracto del producto se diluyó a 12.8 g/l con caldo de lixiviado de cerebro y corazón de NaCl al 3 % estéril, que se sometió a una dilución en gradiente de manera que la concentración final del producto fue 0.1 g/l, 0.2 g/l, 0.4 g/l. L, 0.8 g/L, 1.6 g/L, 3.2 g/L, 6.4 g/L. La concentración final de Vibrio parahaemolyticus se determinó mediante dilución multiplicativa. Se añadió 100 ul de suspensión bacteriana de Vibrio parahaemolyticus, se agitó bien e incubar a 37°C durante 24 horas en una incubadora a temperatura constante. La concentración mínima de producto que claramente inhibió el crecimiento bacteriano (no se volvió turbia) fue su concentración mínima inhibidora. La concentración bactericida mínima fue aquella en la que no crecieron colonias después de sembrar la placa.